细胞增殖检测是通过定量分析细胞在特定条件下的数量变化、代谢活性或DNA合成等指标,评估细胞生长、分裂及增殖能力的关键技术,广泛应用于生物医学研究、药物筛选及临床诊断。
细胞增殖检测的核心检测方法:
直接计数法
原理:通过血细胞计数板或自动细胞计数仪直接统计细胞数量,绘制生长曲线评估增殖速率。
特点:操作简单、成本低,但无法区分增殖与非增殖细胞,适合初步筛查。
应用:基础研究中的细胞生长曲线绘制、药物处理后的细胞数量变化监测。
代谢活性检测法
原理:利用活细胞代谢能力还原底物(如MTT、CCK-8),通过检测吸光度或荧光强度间接反映细胞数量。
特点:操作简便、适合高通量筛选,但受细胞代谢状态影响(如静止期细胞可能呈假阴性)。
应用:药物毒性筛选、细胞活力评估。
DNA合成检测法
原理:标记DNA合成原料(如BrdU、EdU),通过抗体或化学发光检测增殖细胞。
特点:特异性高、能准确反映DNA合成活性,但需固定细胞(无法进行后续活细胞实验)。
应用:细胞周期分析、药物对DNA合成的影响研究。
细胞周期分析法
原理:结合PI染色与流式细胞术,检测DNA含量分布,分析各周期(G0/G1、S、G2/M)细胞比例。
特点:可精确评估增殖指数,但需优化细胞固定和染色条件。
应用:肿瘤细胞增殖动力学研究、药物对细胞周期的影响分析。
蛋白质标记法
原理:检测增殖相关蛋白(如Ki-67、PCNA)的表达水平,通过免疫组化或流式细胞术定量分析。
特点:适用于组织切片分析,但需优化抗体选择和实验条件以避免非特异染色。
应用:临床样本中肿瘤细胞增殖活性评估。
ATP含量检测法
原理:基于ATP与活细胞数目的线性关系,通过化学发光法检测ATP含量反映细胞活力。
特点:灵敏度高、操作快速,但需排除死细胞干扰。
应用:细胞活力检测、药物毒性评估。