QPCR

QPCR

实验原理

QPCR基于传统的聚合酶链反应（PCR）技术，通过逐渐扩增目标DNA或cDNA的数量使其可检测。与传统PCR不同的是，qPCR在扩增过程中同时进行荧光信号的实时监测。

qPCR的原理基于荧光探针（例如TaqMan探针或SYBR Green I染料）。这些探针通过与目标序列的特异性结合，在PCR过程中释放荧光信号。

SYBR Green I：该染料能与DNA双链结合，当PCR扩增产生新的双链DNA时，SYBR Green I与其结合并发出荧光信号。

TaqMan探针：该探针由引物和荧光探针组成，荧光探针含有一个荧光染料和一个荧光猝灭剂。在PCR扩增过程中，荧光探针通过引物特异性结合到目标序列上，并且Taqpolymerase酵素的核酸酶活性会切除掉荧光探针上的猝灭剂，导致荧光染料释放出信号。

 通过检测PCR扩增过程中的荧光信号强度，可以确定目标序列相对起始数量。通常通过计算Ct值（荧光信号达到阈值的循环数）来衡量目标序列的丰度。通过构建标准曲线或使用ΔCt方法，可以将待测样本中目标序列的相对丰度与参考基因或对照组进行比较。

实验步骤

 提取核酸、反转录（仅适用于RNA样本）、预处理、设计引物和探针、准备反应体系、执行PCR循环、数据分析

应用途径

1.定量分析未知模板；2.单个或多个基因表达谱分析

实验结果