人正常肝细胞THLE-2

准备BEGMkit培养基（Lonza/Clonetics，CC-3170）备注：培养基包含（A+B），ATCC不使用BEGM试剂盒提供的GA（庆大霉素-两性霉素B混合物）和肾上腺素（Epinephrine），另向其中添加额外的5ng/mLEGF、70ng/mL磷酸乙醇胺和10%FBS。可根据实验要求添加P/S双抗，1%。

A：BEBM基础培养基（货号CC-3171）500ML

B:细胞生长添加剂（货号CC-4175）一套（包含下列试剂）

●BPE,2.0ml●Hydrocortisone,0.5ml●hEGF,0.5ml

●Epinephrine,0.5ml●Insulin,0.5ml●Transferrin,0.5ml

●Triiodothyronine,0.5ml●RetinoicAcid,0.5ml●GA,0.5ml

注意：Theflasksusedshouldbeprecoatedwithamixtureof0.01mg/mLfibronectin,0.03mg/mLbovinecollagentypeIand0.01mg/mLbovineserumalbumindissolvedinBEBMmedium.1）收货前根据说明书培养条件，提前准备细胞培养所需材料。
2）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
3）收货后没有外观损坏的情况下用75%酒精消毒后将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h等待细胞稳定。
4）细胞稳定后在显微镜下确认细胞生长状态，判断细胞的密度并清晰拍照200倍400倍照片最少2张记录反馈细胞状态以防出现售后作为证据，没有照片和反馈默认接受细胞质量没有问题。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。当密度达到80%左右， 传代比例前几次都按照1:2传代，传代后一个倍增周期后可以长成2瓶80%左右密度的细胞时，冻存其中一瓶成1个1ml的冻存管当种子细胞保存，另外一份长满的细胞继续1:2传代，反复操作后冻存细胞种子大约3个以上。后续根据细胞倍增效率和密度可以适当扩大传代比例做实验。

传代比例：
1个T25瓶传2个6cm的培养皿或者2个T25瓶相当于1:2
1个T25瓶传1个10cm的培养皿或者1个T75瓶相当于1:3